運転中のクロス汚染を防ぐために、設計、建設、および運用管理の主な要件は次のとおりです。
1. 実験室の設計および建設、安全な作業システムまたは安全標準の操作手順は、現在の「実験室バイオセーフティのための一般的な要件」GB19489の要件を満たすものとします。
2. PCRは、作業工程、すなわち試薬の保存および調製領域、検体調製領域、増幅領域、および増幅産物分析領域に従って4つの機能領域に分けられる。リアルタイム蛍光PCR機器を搭載すれば、増幅領域と製品分析領域を組み合わせることができます。各機能領域は明確にマークする必要があり、異なる機能領域の機器と物品は混在させてはいけません。
PCRラボの空気流方向は、試薬保管および製造領域→検体調製領域→増幅領域→増幅産物分析領域に従って行い、増幅された製品が空気流とともに前増幅領域に入るのを防ぐことができます。試薬保管・製造エリア→検体製造エリア→増幅領域→増幅産物分析エリアから空気圧を低下させる方法で行うことができる。それは排気ファン、負圧排気装置または他の実現可能な方法を取付けることによって達成することができる。
3. 各作業領域に入ることは厳密に単一方向、すなわち試薬の貯蔵および準備区域→検体準備領域→増幅領域→増幅産物分析領域に厳密に従うべきである。異なる作業領域 (色の異なるなど) を使用する必要があります。作業員は、各作業域を離れる際に作業服を取り出してはならない。
4.実験室の洗浄は、試薬の貯蔵および準備領域→検体準備領域→増幅領域→増幅製品分析エリアの方向に行われるべきである。異なる実験領域は、クロス汚染を防ぐために独自のクリーニング器具を持っている必要があります。
5. 作業が終わったら、作業領域を直ちに清掃する必要があります。作業領域の実験室ベンチの表面は、次亜塩素酸ナトリウムなどの化学物質の消毒および洗浄効果に耐えることができるはずです。実験室ベンチの表面に紫外線照射は便利で効果的であるべきである。紫外線照射の距離とエネルギーは除染効果に非常に重要であるため、可動紫外灯(254nm波長)を使用することができ、作業が完了した後、実験テーブル上で60〜90cm以内に照射するように調整することができます。増幅産物は数百または数十塩基対(bp)だけであるため、UV損傷に敏感ではないため、UV照射増幅断片は、より長い時間、好ましくは一晩照射されなければならない。
試薬の貯蔵および調製領域の機能は、貯蔵試薬の調製、試薬の塗布および増幅反応混合物の調製、ならびに遠心管および先端のような消耗品の貯蔵および調製である。検体調製に使用する貯蔵試薬や消耗品などの材料は、試薬の保存および準備領域に直接輸送する必要があり、増幅検出領域を通過することはできません。キット内の正の制御材料と品質管理材料は、この領域に保管しないでくださいが、この領域に格納する必要があります。検体加工エリア。
検体調製領域の機能は、核酸(RNA、DNA)抽出、保存および増幅反応チューブへの付加である。臨床サンプルを含む操作の場合、バイオセーフティの二次検査室の保護具、個人保護、および動作仕様の要件を満たす必要があります。サンプル混合や核酸精製の際にエアロゾルによる汚染が発生する可能性があるため、この領域では、隣接するエリアからのエアロゾル汚染を避けるために、この領域で正圧条件を確立することができます。試料間の交差汚染を避けるために、試験対象の核酸を添加した後、反応混合物を含む反応管を覆わなければならない。感染の可能性がある材料については、蓋を生物学的安全キャビネットに開く必要があり、サンプル処理と不活性化のための明確な手順が必要です。
増幅領域の機能は、DNA合成、DNA増幅および検出です。エアロゾルによる汚染を避けるために、この地域を歩くことは最小限に抑えるべきである。この領域ですべての試験された反応管を開けてはならないことに留意しなければならない。
増幅された製品分析領域の機能は、ハイブリダイゼーション、酵素消化電気泳動、変性性液体分析、配列決定など、増幅断片のさらなる分析と決定です。核酸増幅産物は、膜上またはマイクロプレートまたはチップ上のプローブハイブリダイゼーション方法(放射性核種標識または非放射性核種標識)、直接または消化されたアガロースゲル電気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、サザン転写、核酸スク流法、質量分析法など、様々な分析方法を有する。
増幅産物分析領域はPCRの検査室での増幅産物汚染の主な原因であるため、この分野の商品や作業服を通して増幅産物を運び出さないように注意する必要があります。PCR-ELISA法を用いて増幅産物を検出する場合、プレート洗浄剤を使用してプレートを洗浄し、廃液を1mol/L HClに回収する必要があり、実験室に注がれなければならず、PCRラボから廃棄する必要があります。ドロップ。使用したチップは、1mol/L HClに浸し、焼却などの手順に従って処分のためにゴミ袋に入れる必要があります。この領域は、臭化エチジウム、アクリルアミド、ホルムアルデヒド、放射性核種などの特定の遺伝子変異および毒性物質を使用する可能性があるため、実験者の安全保護に注意する必要があります。